色谱柱高pH不耐受？看AlphaHybrid C18如何轻松应对碱性条件分析方法

硅胶颗粒在高pH条件下的溶解问题

硅胶作为高效液相色谱柱的填料基质，尽管被广泛采用，但其性能并非完美无缺，存在一些固有的缺陷。通常认为，当硅胶填料长时间持续暴露在pH>8的环境中，硅胶骨架可能会发生溶解，这种溶解现象会导致柱效显著下降，峰形变差，保留时间缩短等问题，进而影响分析实验的正常进行。
目前，关于硅胶填料在高pH条件下损坏的机理已有较为普遍的认识，如图1所示，即氢氧根离子（OH－）攻击硅胶骨架中的硅氧键，释放出原硅酸。随着硅胶颗粒基体的溶解，孔洞逐渐形成，这些孔洞的累积最终可能导致柱床的塌陷，从而严重影响色谱柱的性能。

图1 硅胶骨架溶解过程

然而某些样品的分析在碱性条件下具有更好的分离效果和分析效率，甚至某些化合物在碱性条件下才稳定，如何应对高pH条件下的色谱分析呢？
杂化硅胶颗粒解决高pH条件分析难题

为了克服纯硅胶基质填料的局限性，华谱科仪研发团队推出技术创新的杂化硅胶颗粒。这种杂化硅胶颗粒通过在硅氧骨架中引入亚乙基桥结构。该结构中Si-C键具有更高的化学稳定性，且完全释放出一个亚乙基桥单元，需要破坏6个硅氧键，这使得杂化硅胶颗粒在高pH条件下具有更高的耐受性。

图2 杂化硅胶骨架结构

华谱科仪研发团队以最新研发的杂化颗粒为载体，结合特有的键合技术和表面修饰，隆重推出AlphaHybrid C18产品。该产品将pH耐受范围拓宽至12，突破了反相色谱柱在高pH条件下的应用限制，为方法开发、分析检测带来新的选择！
对AlphaHybrid C18耐碱性进行考察，AlphaHybrid C18在50 mM的三乙胺（pH=10）、柱温50℃的条件下共经过300 h，柱效依然保持在80%以上。

图3 AlphaHybrid C18耐碱性能测试

AlphaHybrid C18色谱柱应对碱性色谱条件分析案例

以下展示采用AlphaHybrid C18色谱柱在碱性流动相条件下测试的化药案例，分别为：阿奇霉素、氯氮平和β受体阻断剂。

案例一阿奇霉素有关物质分析
阿奇霉素目前中国药典（ChP）、美国药典（USP）、欧洲药典（EP）均采用HPLC法进行有关物质的分析，其中ChP规定的流动相 pH 值为8.2，USP和EP规定的流动相 pH 值为8.9，这就要求实验所用色谱柱需要具有良好的耐碱性能。
本实验参照欧洲药典（EP）方法，采用 AlphaHybrid C18, 4.6×250 mm, 5 μm色谱柱对阿奇霉素有关物质项下系统适用性及峰鉴别溶液进行分离，实现阿奇霉素和13种杂质的良好分离。
色谱条件
仪   器：华谱科仪S6000高效液相色谱仪；
色谱柱：AlphaHybrid C18, 4.6×250 mm, 5  μm；
流动相：A_1.8 g/L磷酸氢二钠溶液（pH=8.9）,B_甲醇：乙腈=25：75；
流   速：1.0 mL/min；
进样量：50 μL；
柱   温：65℃；
检测器：UV@210 nm；
梯   度：

实验结果

表1  阿奇霉素系统适用性结果

图5  阿奇霉素峰鉴别溶液

表2 阿奇霉素峰鉴别结果

案例二氯氮平及杂质分析

本实验参照2020版《中国药典》氯氮平有关物质的液相分析方法，采用AlphaHybrid C18, 4.6×150 mm, 5 μm色谱柱对氯氮平及四种氯氮平杂质进行分离分析，分离性能良好。
色谱条件
仪   器：华谱科仪S6000高效液相色谱仪；
色谱柱：AlphaHybrid C18, 4.6×150 mm, 5  μm；
流动相：甲醇：0.4%三乙胺-水=70：30；
流   速：1.0 mL/min；
进样量：10 μL；
柱   温：30 ℃；

检测器：UV@257 nm.

实验结果

（峰1_氯氮平杂质A；峰2_氯氮平杂质D；峰3_氯氮平杂质C；峰4_氯氮平；峰5_氯氮平杂质B；）

图6 氯氮平测试结果色谱图

表3氯氮平测试结果

案例三7种β受体阻断剂分离

采用AlphaHybrid C18,4.6×150 mm,5 μm色谱柱，对包括索他洛尔、阿替洛尔、拉贝洛尔、吲哚洛尔、美托洛尔、比索洛尔、普萘洛尔在内的7种β受体阻断剂进行分离测试，实现了良好分离。

色谱条件
仪   器：华谱科仪S6000高效液相色谱仪；
色谱柱：AlphaHybrid C18, 4.6×150 mm, 5  μm；
流动相：A：10 mM碳酸氢铵（pH=10.5）；B：乙腈；
流   速：1.0 mL/min;
进样量：10 μL;
柱   温：30 ℃;
检测器：UV@230 nm;
梯   度：

实验结果

表4 β受体阻断剂测试结果

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